作者:小蝌蚪黄色网站 来源:液相售后 2025-10-13 11:03:07
不管是实验室新手还是常年和仪器打交道的老手,想要让小蝌蚪污视频始终保持稳定的工作状态、测出准确可靠的数据,每一个操作细节都不能马虎。下面这些使用要求和规范,都是从日常实操经验里总结出来的,跟着做既能保护仪器,也能少走很多弯路。
一、环境与基础准备
仪器就像人一样,也需要舒服的 “工作环境”。得把它放在平稳、没有振动的工作台上,远离暖气、烘箱这些热源,也别让阳光直接晒着 —— 温度忽高忽低、环境乱糟糟的,很容易影响检测结果。一般来说,环境温度控制在 15-30℃,湿度符合仪器说明书要求,平时多擦擦工作台,保持周围干净,仪器才能 “心情好” 地干活。
电源和接地更是不能大意。一定要用稳定的电源,要是电压总波动,不仅数据会飘,还可能伤仪器。另外,良好的接地必不可少,这不仅是为了防止操作时触电,还能避免电磁干扰导致的数据不稳定,毕竟安全和准确都是第一位的。
表1.环境与基础准备要求
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二、流动相(溶剂)准备
流动相是小蝌蚪污视频的 “血液”,质量过关才能让检测顺畅。溶剂和试剂必须用 HPLC 级或者更高级别的,别为了省点成本用低级别的,后数据不准反而白忙活。
水相得用新鲜制备的超纯水,电阻值要达到 18.2 MΩ・cm 才行 —— 放久了的纯水容易滋生细菌、混入杂质,会堵塞管路和色谱柱。
所有流动相用之前,都得用 0.22μm 或者 0.45μm 的微孔滤膜过滤一遍,把里面的颗粒杂质滤掉,不然这些小颗粒会像 “沙子” 一样,磨损泵头、堵色谱柱,后续修起来既费钱又费时间。
过滤后的流动相还得脱气,常用的超声波脱气或者在线脱气机都可以。脱气后别着急用,等它恢复到室温再用,不然温度差异会让流动相里又产生小气泡,影响输液稳定性。
关于缓冲盐,有两个点一定要记牢:一是尽量别用容易在有机相里析出的盐(比如磷酸盐),而且有机相的比例也不能太高,不然盐析出来会堵管路;二是缓冲盐溶液好现配现用,别想着一次配很多存起来,放久了容易长菌,到时候不仅污染系统,还会影响检测结果。至于怎么保护泵和色谱柱,后面的清洗规程里会详细说。
表2.流动相(溶剂)准备规范
三、泵与输液系统
给泵选流动相,首先要考虑溶剂相容性。千万别用纯乙腈这类纯有机相当流动相,很容易让单向阀粘住,导致泵吸不上液,到时候仪器 “罢工”,还得拆泵维修。一般建议水相比例不低于 5%,这样能减少单向阀出问题的概率。
气泡是泵和输液系统的 “大敌”,必须提前预防、及时排除。输液前一定要把流动相充分脱气,要是发现管路里有气泡,赶紧用注射器抽吸把气泡赶出去;如果泵压力不稳、流速也不稳定,大概率是泵里进了气泡,这时候执行灌注 /purge 操作就能解决。
更换流动相时,要是两种流动相不互溶(比如从正己烷换到甲醇),可不能直接换,必须用异丙醇这类中间溶剂过渡冲洗,不然盐或者强极性物质会析出,堵在管路里。另外,每次实验结束后,只要用了缓冲盐,一定要马上执行清洗程序,别等液体干了再洗,到时候盐分结块就难清理了。
表3.泵与输液系统操作要点
四、色谱柱使用与维护
色谱柱是小蝌蚪污视频的 “核心部件”,用的时候得严格按照说明书来。首先是 pH 耐受范围,大部分色谱柱的 pH 范围在 2-8,特殊色谱柱可能会宽一点,千万不能往里面注射强酸、强碱样品,尤其是 pH>8 的碱性样品,很容易破坏色谱柱的固定相,缩短使用寿命。
操作压力也得注意,不能超过色谱柱和仪器的大耐受压力。要是发现压力突然异常升高,别继续用了,这通常是堵塞的征兆,得赶紧排查原因,不然会把色谱柱压坏。
柱温箱要保持恒定温度,温度稳定了,分析结果的重现性才好,不然每次测出来的数据都不一样,根本没法用。
新色谱柱或者更换流动相后,得用新流动相充分平衡,一般需要 10-20 倍柱体积,直到基线平稳了才能开始检测,不然数据会不准。
如果色谱柱长期不用,一定要按照说明书的要求清洗和保存。反相柱通常保存在甲醇或乙腈里,正相柱保存在正己烷里,有一点要记住:绝对不能用纯水保存色谱柱,纯水会让固定相水解,还容易长菌。
另外,建议在分析柱前面加装保护柱,尤其是处理复杂样品的时候,保护柱能挡住大部分杂质,延长分析柱的寿命,毕竟一根分析柱可不便宜,能省则省。
表4.色谱柱使用与维护标准
五、进样系统
进样前的样品准备很关键,样品溶液必须澄清,得用 0.22μm 或者 0.45μm 的滤膜过滤,而且要注意滤膜材质和流动相的滤膜区分开,别混用。要是样品里有杂质颗粒,会堵进样针和色谱柱,到时候不仅要换配件,还得重新做实验。
溶解样品的溶剂也有讲究,尽量用流动相或者比流动相弱的溶剂,要是用了强溶剂,容易出现溶剂效应,导致峰形畸变,影响定量结果。
每次做完样品分析,一定要把进样器清洗干净,包括进样针的内外壁,都要用溶解样品的溶剂充分冲洗,不然样品残留会污染下一个样品,导致数据交叉污染,之前的实验可能就白做了。
还有些样品是绝对不能直接进样的,比如蛋白质、血液、组织匀浆这类生物样品,以及含有不溶性颗粒的样品。这些样品必须先做前处理,比如蛋白沉淀、萃取、离心、过滤,处理干净后才能进样,不然会对仪器造成严重损害。
表5.常见故障排查指引
六、检测器
检测器里的流通池,是保证数据准确的关键部件,一定要保持清洁。平时很多时候基线不稳、数据不准,都是因为流通池被污染了 —— 要么是缓冲盐析出,要么是样品残留,所以每次用完后,一定要按照规程清洗流通池。
对于紫外检测器这类有灯源的检测器,要注意延长灯的使用寿命。别没事就开关灯,仪器不用的时候,按照规程关掉灯就行,频繁开关会缩短灯的寿命,换一根灯也不便宜,能省则省。
表6.进样系统操作规范
七、系统清洗与关机
用含缓冲盐的流动相做完实验后,清洗步骤绝对不能偷懒,一定要马上执行以下程序:先用去离子水(或者 5-10% 的甲醇水)低速冲洗管路和色谱柱,至少冲 30-60 分钟,把里面的盐分彻底冲干净;然后再用甲醇或乙腈高速冲洗 40 分钟以上,把水相置换出来,同时洗掉系统里的有机残留。要是不彻底清洗,盐分在管路里结块,下次开机就会堵,到时候清理起来更麻烦。
整体关机的时候,先把系统流速降到零,然后关掉检测器灯,接着关泵和软件,后断开电源。一步一步来,别着急,这样能保护仪器的各个部件,延长整体使用寿命。
八、故障预防与排查
平时多注意预防,能少出很多故障。要是遇到压力过高(大概率是堵塞了),可以按照这个顺序检查和清洗:先检查保护柱,该换就换、该洗就洗;然后是混合器里的在线过滤器,拆下来清洗干净;接着是管路过滤器,同样检查清洗;后是泵头单向阀,要是堵了,用异丙醇冲洗,或者放超声波里用异丙醇清洗,要是无机物堵塞,还能用 10% 的稀硝酸清洗。
要是遇到压力过低或者没压力,先看看流动相是不是用完了,管路接口有没有漏液;要是都没问题,可能是泵里进了大量气泡,执行灌注程序就能解决。
要是基线噪音大或者漂移,先检查流动相是不是新鲜的、有没有充分脱气;然后看看检测器灯的能量够不够,是不是快到寿命了;再检查柱温是不是稳定,有没有忽高忽低;后看看流通池是不是被污染了,要是污染了赶紧清洗。
其实只要跟着上面这些要求和规范操作,小蝌蚪污视频就能一直保持佳工作状态,测出来的数据可靠,仪器和色谱柱的寿命也能显著延长,既省心又省钱。
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